一、高背景信号
| 可能原因 | 解决方法 |
| 洗板不充分 | 将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保洗涤充分 |
| 确保在洗涤前弃掉了所有残留抗体溶液 | |
| 样品或标准品中含干扰物 | 设置空白对照 |
| 缓冲液受污染 | 重新配制缓冲液 |
二、无信号
| 可能原因 | 解决方法 |
| 试剂添加顺序错误或试剂配制有误 | 重复实验 |
| 检查试剂配制方法 | |
| 复核试验试剂添加流程 | |
| HRP被叠氮化合物污染 | 使用新鲜配制的试剂 |
| 抗体用量不足 | 使用推荐的抗体量 |
三、整板呈规则蓝色
| 可能原因 | 解决方法 |
| 洗板不充分或跳过洗板步骤未去除残留的非结合过氧化物酶 | 严格按照说明书洗涤流程操作 |
| 封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染 | 每步均需使用新的封板膜或试剂储液槽 |
| 缓冲液有金属或HRP污染 | 配制新鲜缓冲液 |
四、标准曲线不佳梯度不明显
| 可能原因 | 解决方法 |
| 实验操作流程有误 | 严格按照说明书操作流程 |
| 标准曲线稀释计算错误 | 重新计算制作新的标准曲线 |
五、板内重复性差
| 可能原因 | 解决方法 |
| 洗板不充分 | 将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保洗涤充分 |
| 重复使用封板胶纸 | 每步均需更换使用新的封板胶纸 |
| 未使用封板胶纸 | 需使用封板胶纸 |
六、板间重复性差
| 可能原因 | 解决方法 |
| 洗板不充分 | 将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保洗涤充分 |
| 确保已在洗涤前弃掉所有残留溶液 | |
| 孵育温度发生变化 | 严格按照推荐的温度孵育 |
| 勿在环境温度变化大的地方孵育 | |
| 操作流程改变 | 严格按照相同的操作流程 |
| 封板胶纸重复使用导致HRP残留污染 | 每一步均使用新的封板胶纸 |
七、标准曲线佳但样品孔无信号
| 可能原因 | 解决方法 |
| 样品中无检测物或表达量极低 | 设置阳性对照 |
| 重复实验 |
八、整版读数偏低
| 可能原因 | 解决方法 |
| 酶标仪波长设置不正确 | 检查酶标仪参数设置 |
| 包被的酶标板超过使用效期 | 更换新批次试剂盒 |
九、边缘效应
| 可能原因 | 解决方法 |
| 孵育温度不均衡 | 孵育时使用封板胶纸 |
| 勿在环境温度变化大的地方孵育 |
十、显色缓慢
| 可能原因 | 解决方法 |
| 酶标板未处于正确温度下 | 确保使用前酶标板和试剂处于室温下 |
| 溶液污染 | 避免使用含NaN3的试剂 |
